根據(jù)不同細(xì)胞采取不同的培養(yǎng)細(xì)胞傳代方法。懸浮生長的細(xì)胞可以用直接吹打或離心分離后傳代，或自然沉降法吸除上清后，再吹打傳代。貼壁生長的細(xì)胞用消化法傳代，部分貼壁生長的細(xì)胞用直接吹打即可傳代。

 

細(xì)胞傳代培養(yǎng)時(shí)常用的酶為胰蛋白酶，它可以破壞細(xì)胞與細(xì)胞、細(xì)胞與培養(yǎng)瓶之間的細(xì)胞連接或接觸，從而使它們之間的連接減弱或完全消失。經(jīng)胰蛋白酶處理后的貼壁細(xì)胞在外力（如吹打）的作用下可以分散成單個(gè)細(xì)胞，再經(jīng)稀釋和接種后就可以為細(xì)胞生長提供足夠的營養(yǎng)和空間，達(dá)到細(xì)胞傳代培養(yǎng)的目的。
 

01
貼壁細(xì)胞的消化法傳代
1）吸除或倒掉瓶內(nèi)舊培養(yǎng)液。
2）向瓶內(nèi)加入3-5ml PBS，輕輕搖動(dòng)培養(yǎng)瓶，使PBS流過所有細(xì)胞表面，然后吸掉或倒掉PBS后再加1~2 mL新的消化液進(jìn)行消化。
3）最好在37℃或25 ℃以上室溫環(huán)境下進(jìn)行消化。消化2~5 min后把培養(yǎng)瓶放置在顯微鏡下進(jìn)行觀察，發(fā)現(xiàn)細(xì)胞質(zhì)回縮、細(xì)胞間隙增大后，應(yīng)立即終止消化。
4）加完全培養(yǎng)基3-5ml，終止消化。
5）用彎頭吸管，吸取瓶內(nèi)培養(yǎng)液，反復(fù)吹打瓶壁細(xì)胞，吹打過程要順序進(jìn)行，從培養(yǎng)瓶底部一邊開始到另一邊結(jié)束，以確保所有底部都被吹到。吹打時(shí)動(dòng)作要輕柔不要用力過猛，同時(shí)盡可能不要出現(xiàn)泡沫，這些都會(huì)對(duì)細(xì)胞有損傷。細(xì)胞脫離瓶壁后形成細(xì)胞懸液。
6）計(jì)數(shù)，分別接種在新的培養(yǎng)瓶內(nèi)。

02
懸浮細(xì)胞的傳代
因懸浮生長細(xì)胞不貼壁，故傳代時(shí)不必采用酶消化方法，而可直接傳代或離心收集細(xì)胞后傳代。直接傳代即讓懸浮細(xì)胞慢慢沉淀在瓶底后，將上清吸掉1/2~2/3，然后用吸管吹打形成細(xì)胞懸液后，再傳代。懸浮細(xì)胞常采用離心方法傳代，即將細(xì)胞連同培養(yǎng)液一并轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi)，800~1 000 r/min離心5 min，去除上清，加新的培養(yǎng)液到離心管內(nèi)，用吸管吹打形成細(xì)胞懸液，然后傳代接種。

03

半懸浮細(xì)胞的傳代

半懸浮細(xì)胞部分呈現(xiàn)貼壁生長現(xiàn)象，可不經(jīng)消化處理直接吹打使細(xì)胞從瓶壁上脫落下來，而進(jìn)行傳代。但這種方法僅限于部分貼壁不牢的細(xì)胞，如SP2/0細(xì)胞等。直接吹打?qū)��?xì)胞損傷較大，細(xì)胞也常有大量丟失，因而絕大部分貼壁生長的細(xì)胞均需消化后，才能吹打傳代。