正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定

測定意義：

Gu 廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞中，不僅是組成蛋白質的 20 種氨基酸之一，而且通過轉氨基作用參與多種氨基酸合成，是生物體內主要氨基來源之一。此外，Glu 還是味精的主要有效成分，常用做食品添加劑以及香料生產。

測定原理：

利用專用提取液提取，然后用顯色劑進行顯色，顯色后在 570nm 下進行測定。

需自備的儀器和用品：

可見分光光度計、臺式離心機、可調式移液器、1 mL 玻璃比色皿、研缽、冰、蒸餾水。

試劑一：液體 100mL×1 瓶，4℃保存；

試劑二：粉劑×1 瓶， 4℃保存；臨用前加入 10mL 蒸餾水，充分混勻溶解，用不完的試劑仍 4℃保存。

1、細菌或培養細胞樣品：
先收集細菌或細胞到離心管內，離心后棄上清；按照細菌或細胞數量（104 個）：試劑一體積（mL）為 500~1000：1 的比例（建議 1000 萬細菌或細胞加入 2mL 試劑一），超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率 20％或 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復 30 次）；8000g 常溫離心 10min，取上清，置冰上待測。

2、組織樣品：按照組織質量（g）：試劑一體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.2g 組織，加入 2mL試劑一），進行冰浴勻漿。8000g 常溫離心 10min，取上清，置冰上待測。

3、血清（漿）或細胞培養液樣品：按照血清（漿）或細胞培養液體積（mL）：試劑一體積(mL)為 1：5~10的比例（建議取 0.2mL 血清（漿）或者細胞培養液加入 2mL 試劑一），進行冰浴勻漿。8000g 常溫離心 10min，取上清，置冰上待測。

測定步驟

1、 分光光度計預熱 30min 以上，調節波長至 570nm，蒸餾水調零。

2、 在有蓋 EP 管中加入下列試劑：

試劑名稱（μL）  測定管   對照管

樣本 1000

試劑一 1000

試劑二 200  200

混勻，90℃水浴 20min（蓋緊，以防止水分散失），流水冷卻，于 570nm 波長處比色，△A=A 測定管-A 對照管。對照管只要做一管。谷氨酸含量計算：

1、標準條件下測定回歸方程為 y = 0.0074x- 0.5255；x 為谷氨酸含量（µg/mL），y 為吸光值。

2、按照血清（漿）或者細胞培養液體積計算

谷氨酸含量(μg/mL)= [(△A +0.5255)÷0.0074×V1]÷(V3×V1÷V2）=1351×(△A+0.5255)

3、按照蛋白濃度計算

谷氨酸含量(µg/mg prot)=[(△A +0.5255)÷0.0074×V1]÷(V1×Cpr)=135.1×(△A+0.5255) ÷Cpr

4、按照樣本質量計算

谷氨酸含量(µg/g 鮮重)=[(△A +0.5255)÷0.0074×V1]÷(W ×V1÷V2)=270.2×(△A+0.5255) ÷W

5、按照細菌或細胞密度計算

谷氨酸含量(μg/104 cell)=[(△A +0.5255)÷0.0074×V1]÷(1000×V1÷V2)=0.27×(△A+0.5255)

V1：加入反應體系中樣本體積，1mL；V2：加入提取液體積，2 mL；V3：加入血清（漿）或細胞培養液體積，0.2 mL； Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；W：樣本質量，g；1000：細菌或細胞總數，1000 萬。

注意：

1、該試劑盒僅適用于發酵液或組織中谷氨酸含量測定，檢測下限為 100µg/mL。

2、標準曲線線性范圍為：100µg/mL -600µg/mL。

3、ΔA 線性范圍為：0.01-2；若大于 2 則需要將上清液用試劑一稀釋至適當倍數后測定，計算公式中乘以相應稀釋倍數。