重組蛋白常見的融合標簽整理匯總
Q：什么是融合標簽？
A：融合標簽是指利用 DNA 體外重組技術(shù)，在目的蛋白 N 端或 C 端進行融合表達的特定蛋白、多肽或寡肽標簽。
Q：融合標簽有什么作用？
A：重組蛋白通過融合標簽與包被在固相基質(zhì)上的特異配基結(jié)合，使重組蛋白定向固定并得以純化，大大簡化了重組蛋白的檢測，同時既能保留天然蛋白的大部分結(jié)構(gòu)，又能實現(xiàn)增加溶解度，防降解，促進分泌，便于純化等功能。
Q：融合標簽的分子量和功能有關(guān)嗎？
A：蛋白融合標簽的分子量越大，對蛋白質(zhì)本身的功能影響越大，所以大分子融合標簽一般只用于檢測或蛋白純化等。常見的小分子量的融合標簽，因其具有很多商品化的標簽抗體，可以節(jié)省使用者制備目的蛋白的單克隆抗體的時間與成本。
Q：是否所有的融合標簽都需要切除？
A：融合標簽較小，免疫原性也很弱，一般不需要切除，對蛋白質(zhì)的后續(xù)應(yīng)用和研究不會產(chǎn)生影響。但是有些大標簽是需要切除的，例如：Dsb 蛋白、FkpA 蛋白、GST 蛋白、SUMO 標簽等。
為了便于將重組蛋白的融合標簽去除，在設(shè)計構(gòu)建載體時需要在標簽蛋白和目的蛋白之間加上蛋白酶識別位點，常用的蛋白酶位點有：HRV 3C 蛋白酶切位點、TEV 蛋白酶切位點、腸激酶切位點、SUMO 蛋白酶切位點等。
Q：融合標簽加在 N 端或 C 端，有什么區(qū)別？
A：蛋白融合標簽對于 N 端或 C 端的選擇性對重組蛋白的結(jié)構(gòu)與特性會造成一定的影響。例如，對于較難表達或較容易降解的蛋白，可將融合標簽選擇在 5’ 端，可以提高重組蛋白的穩(wěn)定性，也可減小對重組蛋白的免疫原性。但是重組蛋白為分泌蛋白，在其分泌到高爾基體的過程中，處于 5’ 端的融合標簽會隨著 5’ 端信號肽的切除而切除，從而失去作用。在目的蛋白結(jié)構(gòu)未知的情況下，可以分別于兩端構(gòu)建標記的表達克隆，以確定哪個更有效。
關(guān)于融合標簽?zāi)�有什么疑問么？歡迎在評論區(qū)留言哦~
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