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RACE技術在基因工程抗體中的應用

瀏覽次數:3106 發布日期:2020-10-28  來源:本站 僅供參考,謝絕轉載,否則責任自負
前言

20世紀80年代后期,隨著分子生物學的迅速發展,使得人們可以通過基因工程技術對天然的分子進行人為的改造,這為抗體藥物帶來了新的突破點和希望。了解和闡明抗體分子的結構及功能,為人類疾病診斷及治療提供了新的推動力。

基因工程抗體


 
為了解決傳統的鼠源性單抗存在的弊端,對鼠源性單抗進行改進以及人源化單抗的研制成為單抗研究的主要方向,隨著分子生物學和細胞生物學的快速發展, 產生了第三代抗體制備技術,即基因工程抗體。主要包含嵌合抗體、改型抗體、完全人源化抗體、單鏈抗體、雙特異性抗體,常于用檢測和治療等方面。而RACE技術讓基因工程抗體的制備工作更加簡化便捷。 

RACE技術

01

RACE技術定義
RACE技術即cDNA末端快速擴增技術(rapid amplification of cDNA ends),基于PCR從低豐度的轉錄本中快速擴增cDNA的5'和3'末端的有效方法。通常用于已知中間片段序列,對未知兩端序列進行擴增的一項技術。

02

RACE和普通PCR在重組抗體中的應用比較

普通PCR和RACE應用比較

普通PCR在抗體基因擴增中的應用

RACE法在抗體基因擴增中的應用


 

普通PCR法在重組抗體中的應用劣勢

RACE技術在重組抗體中的應用優勢

需要很多引物擴增測試

RACE技術特別適合 IG famliy 很多的物種,例如小鼠、人等

N端序列無法精準

 

可以獲得完整的抗體可變區序列,信號肽序列以及5' UTR區域

目前主要基于已知序列設計引物,無法完全覆蓋

RACE技術體系建立后,可以應用于其它物種以及未知序列物種


制備基因工程抗體時需要進行鼠雜交瘤擴增,通常利用5’RACE技術。5’RACE技術的優化將極大的提高基因工程抗體制備的成功率。華安生物進行5’RACE時,常使用加尾法,根據接頭引物和自己設計特異引物,設計巢式PCR來進行二次擴增。

 

5’RACE技術原理

RACE擴增鼠雜交瘤-引物設計


 

1.正向引物:加接頭序列即:

2.反向引物:選擇 mouse IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG3 相似性較高的CH1區域或其它保守區域設計下游引物。
 

Tips:

在逆轉錄、TdT加尾、PCR擴增這三個連續的酶促反應過程中,任何一步的失敗都會導致前功盡棄。


目前華安生物也采用RACE技術開發生產一系列重組兔單克隆抗體,感興趣的同學可以來看看哦~


 

發布者:杭州華安生物技術有限公司
聯系電話:88062880
E-mail:simaxj@huabio.cn

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