病毒是怎樣識別細胞的？對于病毒的入侵，細胞是無動于衷，任憑宰割呢？還是主動防衛，保護自己呢？
 

      2011年發表在JVI（病毒學界期刊，側重于發表病毒學領域基礎機制性的研究工作，包括病毒結構及組裝，病毒基因組復制及基因表達調控，病毒基因多樣性及進化，病毒與細胞之間的相互作用，病毒感染的細胞反應，病毒致病機理及免疫和疫苗及抗病毒藥物研發等方面。）上的一篇文章就展示了這個過程。下面就讓我帶領大家回顧一下這篇故事。
 

Adenovirus with hexon Tat-PTD modification exhibits increased therapeutic effect in experimental neuroblastoma and neuroendocrine tumors
 

 六鄰體Tat-PTD 修飾的腺病毒在神經細胞瘤和神經內分泌瘤試驗中顯示出治療效果增強
 

腺病毒在治療腫瘤中的應用一直在進行，但是少有成效。人類腺病毒5（Ad5）因為其具有不會引發疾病的隱患，不會與人類染色體融為一體的特性，被廣泛用于癌癥治療的溶瘤細胞藥劑。但是其感染性高度依賴于腫瘤細胞表面的柯薩基病毒腺病毒受體（CAR）的表達水平。在這種情況下，感染的細胞過度產生腺病毒纖維蛋白，并在細胞裂解前就被釋放出去，恰好這些釋放的纖維蛋白會抑制未感染的鄰近細胞CAR的表達水平，從而防止病毒的持續侵入，病毒治療效果大打折扣。
 

        所以，這篇故事就是研究人員將Ad5病毒進行改造，在六鄰體蛋白的高度可變區域5（HVR5）編輯了一個HIV-1 Tat蛋白轉導結構域。Tat-PTD的功能是作為細胞穿膜肽，與未修飾的Ad5相比，基因編輯的Ad5在細胞系中的轉導率急劇增加。與此同時，用纖維蛋白同時處理野生型和突變體，發現突變體的感染效率只是略微減少。在活體實驗中，將人的神經細胞瘤以及神經內分泌瘤植入小鼠，將野生型Ad5和（Tat-PTD）基因編輯型分別處理小鼠。發現基因編輯型顯著抑制了腫瘤的生長，且小鼠的存活時間相對更長。所以，研究人員通過給Ad5增加了一條不依賴于識別細胞表面受體（CAR）的另外一條感染路徑（HIV-1 Tat）,從而擴大了其作為溶瘤細胞藥劑的效用。

       在這個故事中，模擬并研究病毒和腫瘤細胞在體外互作來判斷基因編輯的Ad5的表型是非常重要的。文章采用了瑞典ridgeview instrument ab公司的蛋白互作檢測儀Ligand Tracer Green, 用來檢測病毒和腫瘤細胞的實時互作。

腺病毒感染腫瘤細胞需要一個中間的介質，即凝血因子FX。腺病毒先要和FX結合，在識別細胞表面的受體CAR,進而一步一步達到入侵細胞的目的。上圖即基于此。結果表明：Ad5PTD(wt)表現出：在保留階段，更少的依賴FX介導的途徑來保證與SKOV3的識別和結合。再結合realtime PCR的結果，可以明確得到的結論是，在HVR5導入Tat-PTD這一優化，顯著地改變了Ad5依賴于FX介導的病毒結合方式。

同時，研究人員還進行了修飾改造的Ad5與Ad5（wt） 在毒性方面的研究，也就是病毒感染細胞的第二階段。Ad5在癌細胞內的轉錄與復制，包括感染力強弱，感染速度快慢，增殖等檢測試驗。這些檢測都是在病毒與細胞共同孵育后的數天才進行的。此外還有活體實驗。最終確定結論是，研究人員通過給Ad5增加了一條不依賴于識別細胞表面受體（CAR）的另外一條感染路徑（HIV-1 Tat）,從而擴大了其作為溶瘤細胞藥劑的效用。

重組腺病毒載體因其基因組大小適中，易于基因重組操作，繁殖滴度高，易于大量制備和保存，宿主范圍廣，轉導效率高，安全性好，能刺激機體產生強烈的體液和細胞免疫反應等特點，而被廣泛應用于重要感染型疾病及惡性腫瘤的疫苗研究。
 

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