血清沉淀的正確處理方法

瀏覽次數：7099　發布日期：2019-8-16　來源：本站　僅供參考，謝絕轉載，否則責任自負

明明是一瓶優質的血清
偏偏出現沉淀
和血清質量有關嗎？
會影響細胞培養嗎？
如何避免沉淀？
出現沉淀如何處理？

希爾博士說：
“血清沉淀，其實屬于常見現象，
并不會影響血清的品質，
大家不必驚慌！
但很多人對這一現象還不是很了解。”
為此，
我們對“血清沉淀”的幾個常見問題進行了總結，
供廣大科研青年參考。

血清沉淀是什么？
血清中經常會出現肉眼可見的沉淀，其成分有多種類型，產生的原因有很多，主要有纖維蛋白、磷酸鈣還有一些其它成分。

1. 纖維蛋白（Fibrin）
血清中肉眼可見的沉淀物大多屬于這一類型。由于在生產過程中，血清采集、過濾（3 次 0.1 μm過濾）和灌裝處理都是在低溫條件下快速完成, 此時血清中纖維蛋白原（Fibrinogen）處于溶解狀態。但在解凍之后, 血清中纖維蛋白原往往會發生凝集，形成肉眼可見的沉淀。

下圖是血清因反復凍融而造成纖維蛋白原的凝集

2. 磷酸鈣（Calcium Phosphate）
這是一種常見的沉淀成分，通常會造成血清出現云霧狀渾濁。當產品在 37℃保存時，這種現象尤其明顯，在倒置顯微鏡下可觀察到小黑點的存在。這些小黑點在布朗運動的作用下四處游動，常被誤認為是微生物污染。

3. 其他成分（Other）
血清中的其他成分也會形成沉淀，例如膽固醇形成的油脂滴和其他蛋白沉淀等

血清沉淀會影響細胞培養嗎？
1. 細胞生長
我們在出廠前都會對血清進行一系列質檢測試，確保血清質量達到嚴格標準。血清測試和細胞培養經驗也表明，其沉淀成分不會影響血清作為細胞培養添加物的表現。這一點得到了眾多客戶和其他血清供應商的肯定。解凍之后, 血清中纖維蛋白原往往會發生凝集，形成肉眼可見的沉淀。
2. 懷疑污染
磷酸鈣顆粒經常會被當成微生物污染而引發不必要的擔憂。一般情況下，當操作人員融化血清后注意到有霧狀渾濁時，常將其存放在 4℃冰箱中觀察，并考慮接下來是否繼續使用。但這樣會使沉淀進一步增多，反而會使血清更加渾濁，進而誤以為存在血清污染。并且，在倒置顯微鏡下，可在血清中觀察到四處游動的小黑點（磷酸鈣顆粒的布朗運動），更容易使人誤以為存在微生物污染。
為防止這類誤解的產生，我們不建議客戶培養血清來驗證是否存在污染，而是將血清直接接種在細菌培養基上進行培養，以觀察是否有細菌的增殖。并且，進行革蘭氏染色，并在油鏡（100 X 10 倍）下觀察可直接確認是否存在微生物污染。

怎樣操作可以盡量避免沉淀出現？
1. 正確解凍
首先，應按照逐步解凍的方式正確解凍血清：從-20℃取出后，置于 4℃冰箱緩慢解凍，最后置于室溫完成解凍。如果直接從-20℃拿到室溫或 37 ℃水浴解凍，則非常容易產生沉淀。在解凍過程中，請注意時不時緩慢搖晃瓶子，減少沉淀的產生。為避免反復凍融，建議您將血清分裝使用。
2. 使用和保存注意事項
血清沉淀很難預測和避免，出現沉淀后也無需擔憂，這并不會影響血清的品質。已知血清沉淀在以下條件下會有增多的可能：
1) 熱滅活；
2) 37℃培養；
3) 反復凍融；
4) 伽馬射線照射；
5) 2-8℃長期保存；
6) 長期保存于可自動化霜的冰箱中（溫度不穩定）。
血清沉淀的形成機理多種多樣，具體的機理尚不十分明確。我們尚不能準確預測和控制血清沉淀的產生。目前市面上所有品牌的血清產品都存在沉淀現象，這一點可以在各品牌官方網站上關于沉淀問題的聲明上得到證實。

出現血清沉淀該如何處理？
我們建議您采用2000 rpm 離心5分鐘，取上清使用就好，比過濾方便，不需要另外準備濾心和針筒，又不容易污染。

總結：
血清產品中出現沉淀屬于常見現象，但不會影響血清的品質，對細胞培養而言也是沒有任何問題的，大家可以放心使用！