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3種常用基因功能驗正方法簡述

瀏覽次數:4319 發布日期:2018-11-30  來源:http://www.fitgene.com/news/hangyenews/2018/1029/415.html
科研人員在分析項目的過程中,碰到這樣的問題:通過各種手段(選擇清除分析、比較基因組學分析、轉錄組分析)獲得的行駛某種功能的某基因,如果進行實驗的驗正呢?一般分為:基因上調(基因轉染法)、基因下調(基因干擾法)后看蛋白表達水平、細胞功能改變、在體動物模型中相關功能的變化等。
 

相信大家也有人有這樣的疑惑,輝駿生物就以上問題進行有針對性的收集了如下的資料,希望可以幫助到您。
 

1、 RNA 干擾技術

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RNA干擾(RNA interference, RNAi)是指在進化過程中高度保守的、由雙鏈RNA(double-stranded RNA,dsRNA)誘發的、同源mRNA高效特異性降解的現象。由于使用RNAi技術可以特異性剔除或關閉特定基因的表達,所以該技術已被廣泛用于探索基因功能和傳染性疾病及惡性腫瘤的治療領域。

簡單的說如果某基因行駛控制花色為紅的功能(舉例),我們利用RNA干擾技術將這個基因轉錄的mRNA 降解掉,然后看花色的變化,如果不為紅,說明這個基因的確有這個作用。

 

2、 基因敲除技術

輝駿生物基因敲除技術

基因敲除是自80年代末以來發展起來的一種新型分子生物學技術,是通過一定的途徑使機體特定的基因失活或缺失的技術。通常意義上的基因敲除主要是應用DNA同源重組原理,用設計的同源片段替代靶基因片段,從而達到基因敲除的目的。隨著基因敲除技術的發展,除了同源重組外,新的原理和技術也逐漸被應用,比較成功的有基因的插入突變和iRNA,它們同樣可以達到基因敲除的目的。

 

3、 酵母雙雜交


酵母雙雜交

酵母雙雜交系統是將待研究的兩種蛋白質的基因分別克隆到酵母表達質粒的轉錄激活因子(如GAL4等)的DNA結合結構域基因和轉錄激活因子(如GAL4等)激活結構域基因,構建成融合表達載體,從表達產物分析兩種蛋白質相互作用的系統。
 

由于蛋白質直接互作是蛋白質發揮調控作用的重要方式,如果要研究某個基因行駛某功能,可以將這個基因和靶基因都整合到酵母中進行互作研究,從而分析其功能。


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