再論生物化學(xué)發(fā)光測(cè)量?jī)x原理，作用和特點(diǎn)

生物化學(xué)發(fā)光測(cè)量?jī)x的化學(xué)發(fā)光作為一種分析工具的吸引之處就在于檢測(cè)的簡(jiǎn)單性。化學(xué)發(fā)光的實(shí)質(zhì)是自身發(fā)光，這意味著化學(xué)發(fā)光的分析測(cè)試儀器只需要提供一種可以檢測(cè)光信號(hào)和紀(jì)錄結(jié)果的方法就可以了。自發(fā)光檢測(cè)儀需要一個(gè)閉光的樣品室和光檢測(cè)器。最簡(jiǎn)單的便是相片紙或X 光片，甚至視覺(jué)檢測(cè)器都可以。

化學(xué)發(fā)光檢測(cè)方法的簡(jiǎn)單性使得它的應(yīng)用很簡(jiǎn)單并且完全可以自動(dòng)化。但是它的靈敏度又是怎么樣的呢？化學(xué)發(fā)光有如下兩個(gè)內(nèi)在的優(yōu)勢(shì)：

1.絕大多數(shù)的樣品沒(méi)有“背景”信號(hào)，如它們自身不發(fā)光。

2.化學(xué)發(fā)光的檢測(cè)不是一個(gè)比例測(cè)試，這是與熒光和吸收或比色測(cè)試不同的。在熒光測(cè)試中，具有小的Stokes Shift的熒光基團(tuán)非常難檢測(cè)。熒光很難從激發(fā)波長(zhǎng)中分辨出來(lái)。 另外一個(gè)問(wèn)題是，特別在樣品是渾濁的情況下有一部分雜光會(huì)進(jìn)入到檢測(cè)器。

在吸收光測(cè)試上，其靈敏度受到限制的根本因素是需要在兩個(gè)相對(duì)較強(qiáng)的信號(hào)之間去區(qū)分一個(gè)較小的差別。

需要注意的是檢測(cè)器對(duì)光譜的敏感性近可能接近化學(xué)發(fā)光的光譜，以得到最大化的靈敏度。一般在自發(fā)光儀中的光電倍增管對(duì)藍(lán)光有最佳的反應(yīng)，對(duì)紅光的末端光譜不太敏感。固態(tài)檢測(cè)器對(duì)紅光有較好的反應(yīng)。

X 光片廣泛用于記錄在尼龍膜、纖維素膜或PVDF 膜上的化學(xué)發(fā)光印跡分析。但是我們需要牢記在心的是X 光片僅能夠用于檢測(cè)紫外到藍(lán)光光譜范圍內(nèi)的光信號(hào)，雖然有一些特殊的光片對(duì)增強(qiáng)的綠光有敏感性。

生物化學(xué)發(fā)光測(cè)量?jī)x液體樣品的檢測(cè)

有一些特定的詞來(lái)描繪化學(xué)發(fā)光檢測(cè)：靈敏度、線性和動(dòng)態(tài)范圍。每一個(gè)詞的意義如下：

1.靈敏度指的是某種東西可靠檢測(cè)的最低水平。“某種東西”是指在一個(gè)分析測(cè)試中的測(cè)試物。測(cè)試物是被標(biāo)記了一種可檢測(cè)的東西，如化學(xué)發(fā)光化合物或的一種酶。分析物也可以是一種通過(guò)與具有標(biāo)記的親合物有特異性結(jié)合反應(yīng)而檢測(cè)的物質(zhì)。所謂的可靠檢測(cè)指的是針對(duì)一個(gè)空白測(cè)試樣品，檢測(cè)器能夠重復(fù)感應(yīng)到最低水平的信號(hào)，而這種信號(hào)是由所檢測(cè)物本身產(chǎn)生的。

2.線性描述的是信號(hào)與分析檢測(cè)物濃度范圍之間的關(guān)系。理想的比例因子是常數(shù)；信號(hào)點(diǎn)與分析檢測(cè)物是一條直線關(guān)系。標(biāo)準(zhǔn)曲線可以不是直線，如s 形，仍是有用的。

3.動(dòng)態(tài)范圍指的是被檢測(cè)物濃度與信號(hào)單一模式的變換范圍。它定義的是分析的工作范圍。

通過(guò)生物化學(xué)發(fā)光測(cè)量?jī)x的化學(xué)發(fā)光得到什么水平的靈敏度呢？答案不一定會(huì)滿足你的要求，“它是有條件的”。在很少情況下，檢測(cè)器的靈敏度或化學(xué)發(fā)光方法會(huì)是檢測(cè)的局限因素。現(xiàn)在的檢測(cè)器可以達(dá)到很高的靈敏度。大多數(shù)情況下，而是其它的一些因素顯示了分析檢測(cè)的靈敏度。最通常的是生物成分（抗體、酶等）的非特異性結(jié)合到反應(yīng)容器和支持物的表面。例如，免疫分析，印跡實(shí)驗(yàn)，核酸雜交和其它的酶聯(lián)結(jié)合實(shí)驗(yàn)都是受制于此因素。