RLE-6TN 大鼠肺上皮Ⅱ型細(xì)胞細(xì)胞說明書
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一、細(xì)胞簡介 |
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細(xì)胞名稱 |
RLE-6TN 大鼠肺上皮Ⅱ型細(xì)胞 |
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生長特性 |
貼壁 |
形態(tài)特性 |
上皮細(xì)胞樣 | |
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培養(yǎng)條件 |
89%1640+10%FBS+1%雙抗 |
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生長條件 |
氣相：5% CO2 ；95% |
空氣 |
溫度：37 ℃ | |
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傳代方法 |
1:2 傳代 ，2~3 天換液/傳代 |
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凍存條件 |
90%FBS+10%DMSO |
支原體檢測 |
陰性 | |
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備注 |
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二、細(xì)胞收到后操作流程
1.收到細(xì)胞拿回實驗室后，先打開外包裝，用 75%酒精擦拭細(xì)胞培養(yǎng)瓶表面，放到顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運輸問題，細(xì)胞會有不同程度影響，先不要打開培養(yǎng)瓶蓋，放到培養(yǎng)箱靜置 4 小時左右，以便穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
2.靜置完成后，取出細(xì)胞培養(yǎng)瓶，鏡檢、拍照，記錄細(xì)胞狀態(tài)(所拍照片作為后期售后依據(jù))。建議細(xì)胞傳代培養(yǎng)后，定期拍照、記錄細(xì)胞生長狀態(tài)。
3.貼壁細(xì)胞：若細(xì)胞生長密度超過 80%時，根據(jù)情況傳代，若細(xì)胞未超過 80%匯合度時，可將瓶裝的完全培養(yǎng)液移入廢液缸中，原瓶（T25 瓶）保留 6-8ml 完全培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)，直至細(xì)胞密度超過 80%以后再進行傳代。
4.懸浮細(xì)胞：將細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)液體轉(zhuǎn)移至離心管，1000RPM 離心 5 分鐘，棄去上清液，管底細(xì)胞沉淀加入 10ml 完全培養(yǎng)基吹打、重懸。放入新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶/皿中培養(yǎng)過夜，根據(jù)細(xì)胞密度及生長情況分瓶傳代。
三、細(xì)胞常規(guī)培養(yǎng)步驟（請嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作）
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入 5mL 培養(yǎng)基混合均勻。在 1000RPM 條件下離心 5 分鐘，棄去上清液，補加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入 6cm 皿中，加入約 6ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜），第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
1、對于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
- 棄去培養(yǎng)瓶中上清液，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細(xì)胞 1-2 次。
- 加 1-2ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培養(yǎng)箱中消化 1-2
分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加 6ml 完全培養(yǎng)基，輕輕吹打細(xì)胞層，盡量把細(xì)胞層吹落、吹散。
- 吹打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 5 分鐘，棄去上清液，補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
- 將細(xì)胞懸液按 1：2 到 1：4 的比例分到新的含 6ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
2、對于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM 條件下離心 5 分鐘，棄去上清液，補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按 1：2 到 1：5 的比例分到新的含 6ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細(xì)胞懸起，將細(xì)胞懸液按 1：2到 1：3 的比例分到新的含 6ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，可進行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，進行離心收集，1000RPM 條件下離心 5 分鐘，去除上清，按凍存數(shù)量加入血清及 DMSO，凍存比例為 90%FBS+10%DMSO。
特別注意：
- 收到細(xì)胞后請盡快更換為含 10% FBS 的新鮮培養(yǎng)基，不建議使用原瓶中運輸用培養(yǎng)基。
- 如簽收時出現(xiàn)培養(yǎng)瓶壁破裂，漏液等情況請及時拍照并聯(lián)系實驗室。
- 細(xì)胞任何售后問題，均需拍照存檔并及時聯(lián)系客服。
