實驗試劑

1. 使用前，將RNase A全部加入Solution I中并于4度保存。

2. 按下表用無水乙醇稀釋DNA Wash Buffer，并于室溫保存。

    D6948-00B: 加入8ml無水乙醇

    D6948-01B: 加入80ml無水乙醇

    D6848-02B: 加入80ml無水乙醇

實驗步驟

1. 取1.5-5ml 菌液10，000 x g室溫離心1min收集菌體沉淀；

2. 小心去除上清液，加250ul Solution I/RNase，渦旋或用移液槍上下吹打重懸菌體。

3. 加250ul SolutionⅡ，來回顛倒4- 6次輕柔混勻，得到澄清的裂解液。

4. 加125ul Buffer N3，顛倒混勻幾次直至出現白色絮狀沉淀，室溫放置2-3min讓其充分反應。

5. 12，000×g 室溫或4℃離心10min得上清，把上清轉移到一個新的離心管內；

6. 加入與上清等體積的ETR Binding Buffer，顛倒混勻7-10次，室溫放置5min。

7. 結合質粒——把結合柱插入2ml收集管，每次轉移700ul混合液至結合柱柱里，8，000×g離心1min，棄濾液。

8. 重復第7步，直至所有上清都過濾完，棄濾液。

9. 加入500ul ETR Wash Buffer到結合柱上，8，000×g離心1min，使全部液體濾過柱子，棄濾液。

10. 加入500ul Buffer EHB到結合柱上，8，000×g離心1min，使全部液體濾過柱子，棄濾液；

11. 加入700ul DNA Wash Buffer到結合柱上， 8，000×g離心1min使全部液體濾過柱子，棄濾液；

注意：濃縮的DNA Wash Buffer在使用之前必須按標簽的提示用無水乙醇稀釋。

12. 加入700ul DNA Wash Buffer到結合柱上，8，000×g離心1min使全部液體濾過柱子，棄濾液；

13. 把空柱子套回離心管，最大轉速（不超過13，0 0 0×g）離心2min干燥柱子；

14. 把結合柱套在一個新的1.5ml離心管中，加入30-50ul Endotoxin-Free Elution Buffer，室溫放置2-5min，最高轉速離心1min洗脫質粒DNA。