FFPE 樣本核酸（DNA/RNA）制備完美解決方案

瀏覽次數：4922　發布日期：2015-4-5　來源：本站　僅供參考，謝絕轉載，否則責任自負

福爾馬林固定、石蠟包埋（FFPE）組織切片的存檔代表了珍貴且來源廣泛的生物醫學研究材料。隨著越來越多的研究人員轉向 FFPE 樣品的分子分析，開發特定的操作步驟，考慮這些樣品的獨特性質就變得越來越重要。QIAGEN 在 FFPE 樣本純化及下游檢測整個流程中都提供完善的解決方案。

QIAamp DNA FFPE Tissue Kit —— 從石蠟包埋組織中純化基因組 DNA

專門優化的裂解及逆轉交聯 Buffer 確保 DNA 的高效釋放
30 分鐘內快速從蠟塊中純化高品質，即用型 DNA
洗脫體積靈活：從 20 μl 到 100 μl
單次制備樣本量可高達 8 塊蠟塊樣本
可在 QIAcube 上面進行自動化純化

使用QIAamp DNA FFPE Tissue Kit，從不同的FFPE組織樣本中純化基因組DNA。采用real-time定量PCR擴增prnp基因（78 bp、464 bp和727 bp）產物

圖1 對從FFPE組織樣本中純化的DNA進行PCR分析。

RNeasy FFPE Kit —— 從石蠟包埋組織中純化總 RNA

優化的裂解和逆轉交聯 buffer 確保 RNA 的高效釋放
操作快速，在 85 分鐘內即可獲得純化的 RNA
含有 DNase，確保無基因組 DNA 的污染
可在 QIAcube 上進行自動化純化

從樣本中去除石蠟后，在優化的裂解緩沖液中，采用蛋白酶K酶切，只需15分鐘即可完成樣本裂解，且不影響RNA的產量。裂解后，將樣本置于80ºC孵化15分鐘，逆轉福爾馬林交聯。然后使用DNase和DNase Booster Buffer高效去除基因組DNA，包括FFPE樣本中的小DNA片段。最后，使用RNeasy MinElute離心柱純化濃縮的RNA。RNA的洗脫體積僅為14–30 µl，因此可以減少下游操作中的反應體積。

圖2 RNeasy FFPE實驗流程。

使用RNeasy FFPE Kit從大鼠腎臟中純化總RNA。在Rotor-Gene Q實時熒光定量PCR分析儀上，使用（+RT）或不使用（-RT）逆轉錄酶進行PGK1（磷酸甘油酸激酶1）的real-time RT-PCR分析。-RT曲線證明，使用RNeasy FFPE Kit純化的RNA中幾乎不含基因組DNA。

miRNeasy FFPE Kit —— 從石蠟包埋組織純化包含 miRNA 的總 RNA

有效純化 miRNA 和總 RNA（見圖 3）
優化的裂解和逆轉交聯 buffer 確保 RNA 的高效釋放
含有 DNase，確保無基因組 DNA 的污染

圖3 來自FFPE樣本的成功的real-time RT-PCR分析。

采用福爾馬林固定大鼠肝臟組織24小時或60小時，然后使用miRNeasy FFPE Kit純化包括miRNA在內的總RNA。使用miScript PCR System和純化的RNA作為模板進行定量real-time RT-PCR分析，檢測miRNA miR-16和miR-29a以及PGK1基因的較大mRNA。結果顯示，從同一洗脫液中可同時檢測到上述兩種miRNA和mRNA。

產品列表：

產品名稱	貨號
QIAamp DNA FFPE Tissue Kit (50)	56404
RNeasy FFPE Mini Kit (50)	74404
miRNeasy FFPE Kit (50)	217504
QIAamp DSP DNA FFPE Tissue Kit (50)	60404
Deparaffinization Solution (16 ml)	19093