1. 如果采用刺激物，則可在實驗前三天腹腔注射3%巰基乙醇酸鈉每只2 mL，獲得的巨噬細胞數要多一些。不采用刺激物，直接開始下面的步驟。

 

2. 拉頸處死小鼠，在75%酒精浸泡1-2 分鐘，移入超凈臺中，仰臥位固定于解剖板上，碘酒消毒腹部皮膚，酒精綿球脫碘。用手術直剪充分剪開腹部皮膚，暴露腹部肌層，再用酒精綿球消毒腹部肌層。

 

3. 用注射器抽取5mL 含雙抗的RPMI 1640 培養基注入腹腔，用綿球輕揉腹部1-2 min，然后，用眼科鑷稍提起腹腔，并用眼科剪剪開一個小口，用吸管吸取細胞懸液，移入離心管中(個人認為，此法比用注射器抽吸好一些)。

 

4. 1000 rpm 離心5 min 后，用含雙抗的RPMI 1640 培養基洗滌一次，再次離心，重懸細胞于含10% 小牛血清的RPMI 1640 培養液中，如果是作為飼養細胞使用，則選擇相應的培養液。臺盼藍拒染法計數，將細胞稀釋到目的濃度后，接種即可。

 

5. 如果是作為飼養細胞使用，調整濃度至2x10⁵個/mL，接種到96 孔板中，每孔100-200 µL；如 果作為其它實驗使用，可以調整成2x10⁶/mL，加到 24 孔平底培養板中，1 mL/孔；5% CO₂溫箱孵育2 h 后， 換液，并用RPMI 1640 培養基洗1-2 次，棄去未粘附細胞，貼壁細胞為單層的巨噬細胞。

二、結果