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蛋白質技術專題:核蛋白的免疫熒光定位實驗

瀏覽次數:3295 發布日期:2013-12-23  來源:上海北諾生物科技有限公司

免疫熒光技術又稱熒光抗體技術,是標記免疫技術中發展最早的一種免疫熒光技術。它是在免疫學、生物化學和顯微鏡技術的基礎上建立起來的一項技術。

實驗方法
免疫熒光定位法
實驗方法原理 免疫熒光細胞化學技術是采用熒光素標記的已知抗體(或抗原)作為探針,檢測待測組織、細胞標本中的靶抗原(或抗體),形成的抗原抗體復合物帶有熒光素,在熒光顯微鏡下,由于受高壓汞燈光源的紫外光照射,熒光素發出明亮的熒光,這樣就可以分辨出抗原(或抗體)的所在位置及其性質,并可利用熒光定量技術計算抗原的含量,以達到對抗原物質定位、定性和定量測定的目的。 
實驗材料 核蛋白 
試劑、試劑盒 甲醇 PB 一抗 二抗 
儀器、耗材 顯微鏡 玻片 蓋玻片 滴管 
實驗步驟 1.  在22×22 mm 的1.5號蓋玻片上培養細胞。理想條件下細胞應長到50%~70%匯合。

2.  在-20℃用100%甲醇固定細胞3分鐘。

3.  用PBS + 1% NGS洗三次,每次10分鐘。

4.  在濕盒里以適當濃度的一抗室溫溫育1小時。

5.  用PBS + 1% NGS洗三次,每次10分鐘。

6.  在濕盒里與稀釋為4 ug/ml 的熒光標記二抗室溫溫育1小時。

7.  用PBS洗四次,每次10分鐘。

8.  用封片劑將蓋玻片封在載波片上,用干凈的指甲油將蓋玻片封邊,防止蓋玻片滑動。
收起  
注意事項 1.  要在蓋玻片一邊角落做記號,以知道細胞在蓋玻片的那一面。

2.  一抗的濃度需要經過實驗摸索確定。

3.  第四步中如果用22×22 mm 蓋玻片,則在蓋玻片上加30 ul 稀釋的抗體,并且將蓋玻片倒置在玻璃載玻片上,然后將載玻片放到濕盒里,在室溫溫育

發布者:上海北諾生物科技有限公司
聯系電話:021-57730393,15800960770
E-mail:beinuobio@163.com

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