人穩定型骨鈣素（1-43/49）特異性酶免試劑盒

【預期用途】

這個ELISA試劑盒是用來對人體骨鈣素（1-43）和骨鈣素（1-49）（也被稱為N端和中部骨鈣素或穩定型骨鈣素）的濃度進行定量檢測。該檢測項目可以用來檢測人的骨形成活性或者成骨細胞活性，他們與代謝性骨疾病中骨更新率的變化相關，例如骨質疏松，原發性甲狀旁腺功能亢進癥，甲狀腺功能亢進，畸形性骨炎以及腎性骨營養不良。

【簡介】

骨鈣素[也叫做骨鈣蛋白質（BGP）]是骨骼和牙本質中的一種主要的非膠原蛋白質。骨鈣素的合成物包括維生素K和維生素D3。新合成的骨鈣素部分釋放到血流中，部分滲入到骨基質中。骨鈣素（1-49）及其片段以及骨鈣素（1-43）都會釋放到血流中去。在血液循環、肝、腎中，骨鈣素（1-49）降解生成穩定型血清骨鈣素（1-43）。當抽取人體樣本進行體外降解時，同樣能生成穩定型血清骨鈣素（1-43），因為骨鈣素（1-49) C端的六個氨基酸不穩定，在體外時，這六個氨基酸極易在室溫下脫落。一些研究證明，臨床上對穩定型骨鈣素[骨鈣素(1-43/49)] 進行測定，其效果更好，它能對骨更新率提供更加精確的評估。

骨鈣素由成骨細胞產生，在骨骼形成過程中，它通常作為一個生物化學指標或者生物指標。在用骨形成藥物 (如Forteo) 治療骨質疏松時，通常能觀察到穩定型血清骨鈣素水平的增高與骨質密度的增加呈現出很強的正相關。在許多藥物治療研究中，骨鈣素是骨形成的特定療效跟蹤和評定的首選生化指標。

【檢驗原理】

這個ELISA的設計，研發和生產的目的是對血清或者血漿樣品中穩定型人骨鈣素（1-43）和骨鈣素（1-49）進行定量檢驗。該試劑盒是基于運用兩種特異性抗體與人骨鈣素的不同抗原表位結合的“雙位點夾心”技術。

將標準品、質控品、和待測樣品加入鏈霉親和素包被的微孔板中。隨后，加入生物素偶聯的人骨鈣素N端特異性多克隆抗體和過氧化物酶標記的人骨鈣素20-43區域特異性單克隆抗體混合物。經過第一個保溫孵育期后，形成了“生物素抗體-人骨鈣素-HRP單克隆抗體”的“雙位點夾心”結構，該免疫復合體在特異性“鏈霉親和素-生物素”親和結合的作用下被吸附到微孔板的內壁。游離的單抗和緩沖基質則被洗滌劑沖走。微孔板加入過氧化物酶基質（3,3',5,5'-四甲基聯苯胺，TMB）并經過一段時間的反應后，測量吸光度。微孔板內壁的免疫復合體的酶活性與樣本中人骨鈣素的濃度成正比。根據標準品中不同的人骨鈣素濃度的吸光度，按照“點到點”或者“4 - 參數法”繪制標準曲線，待測樣品中骨鈣素濃度可以直接從標準曲線按測量到的吸光度得到。

簡要實驗步驟

1. 添加25µL標準品、質控品和病人樣本到指定孔中；
2. 在各孔中添加200µL抗體混合物；
3. 在室溫下，以350 rpm振動培養60分鐘；
4. 將各孔清洗5次；
5. 添加200 µLELISA HRP基質到各個孔中；
6. 將微孔板密封，室溫下靜置20分鐘；
7. 添加50 µLELISA終止液到各個孔中；
8. 讀取450 nm的吸光度。