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醫(yī)科利昊公司提供基因敲除小鼠服務、轉基因小鼠和基因打靶技術服務，基因體內功能研究提供穩(wěn)定可靠的技術平臺
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利用基因打靶技術產生轉基因動锏程序一般為：(1) 構建.基因打靶載體; (2) 將基因打靶載體通過一定的方式(常用電穿孔法) 導入同源的胚胎干細胞中，使外源DNA 與胚胎干細胞基因組中相應部分發(fā)生同源重組,將打靶載體中的DNA 序列整合到內源基因組中從而得以表達; (3) 篩選發(fā)生同源重組的陽性克隆，通過顯微注射或者胚胎凝集的方法將經過遺傳修飾的ES細胞引入受體胚胎內制作嵌合體小鼠，在生物活體中研究特定基因的功能。基因敲除小鼠使得研究者們能夠觀察到某一特定基因完全失活后小鼠表型的改變，從而推斷出特定基因的作用。
基因打靶的原則是, 外源DNA 片段含有與目的基因的某一段核酸序列相同或接近的同源序列, 同源重組就發(fā)生在這兩個序列之間。外源DNA 序列的定位整合有兩種方式，即插入型(又稱O 型) 和置換型(又稱8 型)。與此相對應，打靶載體可分為兩類: 插入型載體和置換型載體。
第一步，胚泡時期發(fā)育胚胎的分離。此胚胎來源于灰色品系的小鼠。
第二步，從灰色小鼠胚泡中分離胚胎干細胞，在體外進行培養(yǎng)。
第三步，用同源重組載體轉染胚胎干細胞，用含有新霉素和更昔韋洛的培養(yǎng)基篩選發(fā)生了同源重組的細胞。
第四步，將篩選得到的胚胎干細胞植入白色小鼠的早期胚胎（胚泡時期）中。
第五步，將上述胚胎植入假孕母鼠（白色）子宮中。
第六步，在母鼠所產的小鼠中，有一些是正常的白色，另一些則是嵌合體灰白相間的小鼠。這些嵌合體小鼠的細胞一部分起源于白色皮毛的胚泡細胞，另一部分則起源于重組的胚胎干細胞。起源于重組胚胎干細胞的皮毛顯示出灰色斑塊，很好辨認。
第七步，嵌合體小鼠與野生型白色小鼠進行雜交，如果嵌合體小鼠的生殖細胞恰好是起源于重組胚胎干細胞，那么其子代小鼠就都應該呈現(xiàn)灰色。而這些灰色小鼠的所有細胞都是雜合體。
第八步，雜合體灰色小鼠（+/H）之間進行雜交，得到灰色和白色的子代。從灰色子代中篩選出純合小鼠（H/H），其一對同源染色體上的等位基因都失活，此純合小鼠即為 “基因敲除小鼠構建”。
我們有開發(fā)的基因敲除小鼠構建APOE(動脈硬化研究),
PEPT(白內障研究)
Shh+/- 基因敲除小鼠構建等小鼠: Shh（Sonic hedgehog）基因在脊椎動物胚胎組織形成中起著重要的作用，包括大腦、脊椎、中軸骨骼和四肢的形成。基因缺失的胚胎早期可以觀察到中間結構如脊索和地板的形成和維持的影響，晚期可以觀察到遠肢結構的缺失以及獨眼，腹部細胞包括神經管的缺失、脊柱和許多肋骨的缺失。Shh蛋白被證實是脊椎動物發(fā)育過程中組織形成所必須的胞外信號。
至善研究院提供轉基因和基因打靶技術服務，基因體內功能研究提供穩(wěn)定可靠的技術平臺。核心服務內容包括載體構建、基因工程小鼠制備和表型分析。
分子生物學服務
1) 轉基因載體 組織特異性啟動子、廣泛表達基因上調與下調啟動子、可控啟動子及各種熒光標記和抗藥性標記
2) siRNA載體 干擾序列設計、篩選或由客戶提供已挑選好的干擾序列
3) 打靶載體 基于Cre-loxP或 Flp-FRT技術的位點特異性重組
4) 表達載體/病毒載體 客戶需提供含有目的基因的質粒或cDNA模板
5) 定點突變服務 客戶需提供原始質粒或DN**斷的測序結果
6) PCR產物克隆 將PCR產物（3’端加A）克隆至T載體
表型鑒定服務
1) 基于lacZ和GFP報告基因的發(fā)育和基因表達分析
2) Northern blot 或western blot
3) 行為學表型分析
4) 免疫組化分析
5) RT-PCR
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