RNAi (RNAinterference, RNA干擾)技術，即將與內(nèi)源 mRNA 編碼區(qū)同源的小片段（19 －23bp）外源雙鏈 RNA（double s`tranded RNA ）導入細胞中，通過一系列細胞內(nèi)反應引發(fā)細胞中相應 mRNA 的降解，從而導致特定基因表達沉默的一種技術。RNAi的作用提供了一種經(jīng)濟、快捷、高效的抑制特異基因表達的技術手段，有助于研究該基因在生物模型系統(tǒng)中的作用，是研究基因功能的重要工具，并且逐步成為病毒性疾病、遺傳性疾病以及腫瘤等的基因治療研究的一種手段。
基本原理示意圖

siRNA載體構(gòu)建服務程序
本公司提供siRNA 載體的構(gòu)建服務，siRNA 載體可以在細胞內(nèi)直接轉(zhuǎn)錄出 shRNA ，其干擾效果等同于siRNA ，而且能夠解決 siRNA干擾時間短的缺點。您只需提供需干擾基因的詳細信息，包括基因的 mRNA 序列，Genbank Accession No. 和所屬物種，本公司負責設計3條針對目的mRNA的siRNA 靶序列，在短時間內(nèi)構(gòu)建三個可用于目的mRNA干擾實驗的siRNA 載體。可以為您節(jié)省大量的時間與精力。此方法是多種siRNA制備方法中唯一可以進行長期基因沉默研究的方法。

siRNA載體構(gòu)建服務程序：
1. siRNA表達載體的選用：
本公司選用的siRNA 表達載體含新霉素抗性基因和GFP綠色螢光標記，可以建立穩(wěn)定表達系，同時可以實時監(jiān)測載體在細胞中的轉(zhuǎn)染效率。載體中還含有Amp抗性基因，可以無限擴增。
2. 設計siRNA靶序列
A 、根據(jù)目的mRNA序列，設計3條RNA干擾靶序列，靶序列一般為19 － 21nt 長。
B 、對于每條選定的siRNA 靶序列，設計 siRNA 正義鏈和反義鏈，以 loop(9nt) 相連，稱為 shRNA（short hairpin RNA）。
C、陰性對照的設立.
3. 合成模板：
合成每條編碼 shRNA的DNA 模板的兩條單鏈，退火 DNA 單鏈得到 shRNA 的 DNA 雙鏈模板。模板鏈后面接有RNA PolyIII聚合酶轉(zhuǎn)錄中止位點，同時兩端分別設計 BamHI 和 HindIII 酶切位點，可以克隆到 siRNA 載體多克隆位點的 BamHI 和 HindIII 酶切位點之間。
4. siRNA 空載體用BamHI和HindIII雙酶切后，1 ％瓊脂糖凝膠電泳，回收線性載體。
5. 連接與轉(zhuǎn)化：
把退火的DNA模板雙鏈連接到線性載體中。采用T4連接酶，插入片斷與載體的摩爾比約為 3 ： 1 。連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化DH5α大腸桿菌，在LB Amp培養(yǎng)基上涂板，37 ℃培養(yǎng)過夜。
6. PCR 鑒定
7. 測序鑒定
8.柱抽提陽性克隆載體并定量。

至善健康醫(yī)學研究院成立于2005年，專業(yè)從事胚胎干細胞、分子生物醫(yī)學及基因工程動物模型敲除的技術研發(fā)、大鼠小鼠Morris水迷宮實驗外包服務及大鼠小鼠海馬側(cè)腦室aav病毒立體定位注射動物實驗服務，視網(wǎng)膜玻璃體定位注射實驗服務，分子生物醫(yī)學科研動物病理生理實驗外包動物病理醫(yī)學科研實驗外包技術服務，提供老年老齡sd大鼠及c57老年小鼠，設有干細胞生物學、分子生物學和基因工程動物表型分析實驗室，可提供用于科學研究和藥物研發(fā)的各類動物胚胎干細胞和人胚胎干細胞、成體細胞、基因工程干細胞株、臍帶間充質(zhì)干細胞、SD大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞、小鼠骨髓間充質(zhì)干細胞及相關培養(yǎng)基，同時提供基因敲除小鼠訂購、轉(zhuǎn)基因小鼠訂購、基因沉默小鼠和轉(zhuǎn)基因小鼠等基因工程動物模型的構(gòu)建和基于干細胞的藥物研發(fā)服務。

    隨業(yè)務范圍的擴大，公司面向海內(nèi)外征集細胞生物學與分子生物學相關產(chǎn)品的合作伙伴。 經(jīng)營范圍：基因敲除小鼠模型建立、銷售基因敲除小鼠、銷售轉(zhuǎn)基因小鼠、顯微注射、基因打靶、條件性敲除、定點敲除轉(zhuǎn)基因載體、基因沉默（siRNA）和質(zhì)粒DNA表達載體構(gòu)建實驗技術服務；胚胎干細胞培養(yǎng)和細胞生物學實驗服務；基因敲除小鼠、基因沉默小鼠和轉(zhuǎn)基因小鼠構(gòu)建；各種細胞株（人胚胎干細胞、小鼠胚胎干細胞、iPS細胞、成體干細胞和腫瘤細胞）；細胞培養(yǎng)基；質(zhì)粒載體；超純水、雙蒸水、去離子水、醫(yī)用蒸餾水銷售小鼠基因敲除小鼠服務價格，RNA干擾載體構(gòu)建技術服務，人胚胎干細胞、小鼠胚胎干細胞培養(yǎng)技術服務，基因沉默小鼠構(gòu)建技術服務，siRNA載體構(gòu)建技術服務，基因沉默構(gòu)建技術服務，載體構(gòu)建技術服務，RNAi表達載體構(gòu)建服務，轉(zhuǎn)基因小鼠構(gòu)建，細胞生物學技術服務，分子生物學技術服務， pcDNA載體構(gòu)建實驗服務，siRNA質(zhì)粒載體構(gòu)建服務，細胞轉(zhuǎn)染技術服務。                    

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      公司秉承“科學至上，銳意進取”的經(jīng)營理念，堅持“客戶第一”的原則為廣大客戶提供優(yōu)質(zhì)的服務。歡迎惠顧！