ApoE基因有三個等位基因E2、E3和E4,共構成六種不同的基因型;
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Apoe基因敲除小鼠原理是利用基因打靶技術產生轉基因動物的程序,基因敲出小鼠程序一般為:(1)構建基因打靶載體; (2)將基因打靶載體通過一定的方式(常用電穿孔法)導入同源的胚胎干細胞中,使外源DNA與胚胎干細胞基因組中相應部分發生同源重組,將打靶載體中的DNA序列整合到內源基因組中從而得以表達; (3)篩選發生同源重組的陽性克隆,基因敲除小鼠構建通過顯微注射或者胚胎凝集的方法將經過遺傳修飾的ES細胞引入受體胚胎內制作嵌合體小鼠,在生物活體中研究特定基因的功能。基因敲除小鼠使得研究者們能夠觀察到某一特定基因完全失活后小鼠表型的改變,從而推斷出特定基因的作用。基因敲出小鼠基因打靶的原則是, 外源DNA 片段含有與目的基因的某一段核酸序列相同或接近的同源序列, 同源重組就發生在這兩個序列之間。外源DNA 序列的定位整合有兩種方式, 即插入型(又稱O 型) 和置換型(又稱8 型)。與此相對應, 基因敲出小鼠打靶載體可分為兩類: 插入型載體和置換型載體;
基因敲除小鼠第一步,胚泡時期發育胚胎的分離。此胚胎來源于灰色品系的小鼠。
基因敲除小鼠第二步,從灰色小鼠胚泡中分離胚胎干細胞,在體外進行培養。
基因敲除小鼠第三步,用同源重組載體轉染胚胎干細胞,用含有新霉素和更昔韋洛的培養基篩選發生了同源重組的細胞。
基因敲除小鼠第四步,將篩選得到的胚胎干細胞植入白色小鼠的早期胚胎(胚泡時期)中。
基因敲除小鼠第五步,將上述胚胎植入假孕母鼠(白色)子宮中。
基因敲除小鼠第六步,在母鼠所產的小鼠中,有一些是正常的白色,另一些則是嵌合體灰白相間的小鼠。這些嵌合體小鼠的細胞一部分起源于白色皮毛的胚泡細胞,另一部分則起源于重組的胚胎干細胞。起源于重組胚胎干細胞的皮毛顯示出灰色斑塊,很好辨認。
基因敲出小鼠第七步,嵌合體小鼠與野生型白色小鼠進行雜交,如果嵌合體小鼠的生殖細胞恰好是起源于重組胚胎干細胞,那么其子代小鼠就都應該呈現灰色。而這些灰色小鼠的所有細胞都是雜合體。
基因敲除小鼠第八步,雜合體灰色小鼠(+/H)之間進行雜交,得到灰色和白色的子代。從灰色子代中篩選出純合小鼠(H/H),其一對同源染色體上的等位基因都失活,此純合小鼠即為 “基因敲除小鼠”。
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