2022年12月22日，IPHASE/匯智和源技術部總監王經理就原代肝細胞的分離、培養與應用在北京總公司召開了研討會，旨在探討出肝細胞的分離方法及應用為廣大客戶在后期做實驗時提供有利的幫助！以下是會議主要內容。

肝臟是藥物代謝的重要器官，體外代謝模型多以肝臟為基礎。常用的體外模型有肝微粒體、肝S9、肝胞質液、原代肝細胞、肝組織切片、重組人代謝酶等。其中，原代肝細胞因具有較好的體外試驗重現性，基本維持了肝臟的代謝功能，特別是較好的保留了與體內一致的酶水平，成為了體外藥物試驗的“金標準”，廣泛應用于藥物代謝與毒理學研究中。

1    原代肝細胞及其應用

原代肝細胞(Primary hepatocytes)是指從動物肝臟取出后立即培養的肝細胞。原代肝細胞作為一種體外模型，具有其它體外模型不可替代的優點：

①與體內環境保持一致，酶量和輔助因子水平都是正常的生理濃度，可以在接近生理狀態的的情況下研究藥物的代謝和毒性；

②較好保留和維持了肝細胞的完整形態和肝細胞體外代謝活性，真實反應了體內的代謝情況。

隨著技術水平的不斷提高，原代培養的動物和人肝細胞已廣泛應用于藥物研究：

①探討藥物在肝中的代謝途徑和藥物藥代動力學的研究；

②評價藥物和外源性物質對肝臟中細胞色素P450酶誘導作用并探討其誘導機制；

③預測和解釋藥物與藥物之間的相互作用；

④研究藥物的細胞毒性等。

2    原代肝細胞分離

肝細胞是高度分化的細胞，具有豐富的酶系及多種特異性功能，被廣泛用于生物化學、實驗性肝損傷、藥代動力學、 毒理學和致癌作用等研究。然而，分離并培養出高活性的原代肝細胞成為了關鍵步驟，分離的原代肝細胞在體外是否能夠存活

目前，原代肝細胞分離常用的方法有直接剪切法、組織塊消化法和兩步膠原酶灌流法等。其中，兩步膠原酶灌流法因其對肝細胞損傷作用較小，在膠原酶消化細胞前使用了螯合劑，提高了肝細胞的產量和活力，分離的肝細胞數量多且活力好，成為了分離原代肝細胞的經典方法。

兩步膠原酶灌注法先使用無鈣灌流液灌注，無鈣灌流液作為預灌液，可以將肝臟內的殘留血液灌注出，除去或者減少細胞間的鈣離子，以減少細胞間的粘著力。經無鈣灌流液灌注后再使用含酶灌流液進行灌注把組織中的細胞釋放出來。膠原酶在消化肝的同時解除了細胞間接觸抑制或活化了潛在的蛋白激酶、生長因子或受體，使肝細胞能逐漸適應消化分離過程中所發生的細胞、外環境及細胞的各種改變，這些改變對離體肝細胞修復、生長及功能有重要的促進作用，有利于肝細胞的培養。

3    原代肝細胞產品

IPHASE/匯智和源憑借多年的技術能力和技術經驗的積累，不斷摸索和優化原代肝細胞分離過程，現已形成猴、犬、大鼠、小鼠等原代肝細胞產品。 4    原代肝細胞優勢

l  安全性

分離原代肝細胞所用動物均經過傳染源檢測，使用安全、更放心。

l  純度高

生產的原代肝細胞經分離純化后純度高，狀態好。

l  活性好

原代肝細胞，復蘇存活率可達90%以上，所有種屬原代肝細胞均經過體外代謝質控，代謝活性強。

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