數(shù)字PCR是一種精準的核酸絕對定量技術(shù)，可對目標基因進行絕對定量，具有卓越的靈敏度和精準度。其靈敏度高的關(guān)鍵因素在于將PCR混合液分割成數(shù)萬個油包水的獨立微滴。液相和油相之間的界面上發(fā)生的化學相互作用可能會影響PCR擴增效率。PCR預混液的組成和性能對于確保靶點的有效擴增和微滴穩(wěn)定性至關(guān)重要。naica® multiplex PCR MIX是數(shù)字PCR頭部企業(yè)法國Stilla Technologies公司生產(chǎn)，專用于在naica® 微滴芯片數(shù)字PCR系統(tǒng)，在整個檢測動態(tài)范圍內(nèi)，提供強大的微滴穩(wěn)定性和卓越線性范圍的多重目標基因的定量檢測。
 

為了達到最佳靈活性和靈敏度，我們提供5X和10X濃度的naica® multiplex PCR MIX以降低MIX用量，從而使得更多的反應體積可供更多的模板、引物或探針的加入。
 

naica® multiplex PCR MIX可在naica®微滴芯片數(shù)字PCR系統(tǒng)的動態(tài)范圍內(nèi)對多個靶點進行同時定量，并保持良好線性。

采用0.2到13000cp/uL的DNA樣本，使用10X naica® multiplex PCR MIX，在naica®微滴芯片數(shù)字PCR系統(tǒng)上進行三個靶點的同時檢測（圖1）。高濃度的PCR MIX（5倍和10倍濃度均可使用）可使樣本輸入體積最大化，從而提高低濃度樣本中目標靶點的檢測能力。

▲ 圖1：使用naica® multiplex PCR MIX同時對3個靶點（BRAF、ALB和pUC18）進行線性定量。將人類基因組(hg)DNA和pUC18質(zhì)粒進行連續(xù)稀釋（0.2、1.5、8.0、50、320、2050和13000cp/uL），各稀釋液進行3次重復檢測。結(jié)果顯示各靶點的線性關(guān)系好，R2均大于0.99，說明結(jié)果高度真實可靠。

在多重檢測中可以對低濃度靶點進行穩(wěn)定且靈敏的檢測。

多重檢測中多個靶點的共擴增比單個靶點的擴增更為復雜，可能會因為潛在的干擾和反應復雜性的影響，導致多重檢測的線性范圍降低。在naica®微滴芯片數(shù)字PCR系統(tǒng)上使用naica® multiplex PCR MIX分別進行3重和單重檢測（圖2），結(jié)果發(fā)現(xiàn)，不管是在高濃度的外部靶點（BRAF和ALB hgDNA）存在的情況下（圖2A）還是在外部靶點不存在的情況下（圖2B），兩組實驗中pUC18線性量化的動態(tài)范圍一致，且陽性微滴和陰性微滴群組的熒光水平和可分性也高度一致。此外，不管是單重還是3重檢測，pUC18靶點都能得到可靠的定量（圖3），且檢測范圍和線性度一致。

▲ 圖2：使用naica® multiplex PCR MIX進行的3重和單重擴增的比較。將pUC18質(zhì)粒的13000至0.2 cp/uL的系列稀釋液在2個外部擴增靶點背景下(每個靶標為3000cp/uL,圖A))和在不含外部靶點(圖B)的情況下進行定量檢測,3次重復。結(jié)果顯示，3重和單重擴增中pUC18的檢測結(jié)果高度一致。注：3重和單重的反應液中均含有pUC18、BRAF和ALB的特異性引物探針。

▲圖3：使用naica® multiplex PCR MIX的擴增結(jié)果真實可靠。采用13000-0.2cp / uL的pUC18 DNA稀釋液進行3重(A)和單重檢測(B)，各稀釋液進行3次重復。(A) 3重反應中額外加入3000cp / uL(10ng)的hgDNA模板；(B) 單重反應中沒有額外加入hgDNA模板。結(jié)果顯示，3重和單重反應中，pUC18均能獲得真實可靠的定量結(jié)果，同時檢測范圍和線性高度一致；3重反應中BRAF和ALB檢測也具有良好的重復性，相對標準偏差在2.3-2.5%之間，n=21。

訂購信息：

Eva Green®染料法的naica® PCR Mix也可訂購。