世界首個質譜掃描31種人乳頭瘤病毒HPV雙基因分型問世

經中國醫學科學院和第四軍醫大學與美國西格諾公司合作，聯合研究開發的多重PCR-Mass質譜掃描法，于2012年11月9日被美國臨床微生物雜志Journal of Clinical Microbiology接收網上發表。

該研究揭示，在女性宮頸癌中HPV檢出率>97%，主要為15種高危型；而男同性戀MSM者中，HPV感染型已經超過30種型，特別是>10種型的高混合型感染的嚴重程度，已經遠超過女性的>5種型的程度，其對健康的影響目前還鮮為人知，應當受到高度關注。

該方法用于檢測世界衛生組織國際腫瘤研究機構（WHO_ IARC）公布的30種與婦女子宮頸病變相關HPV基因型,包括：15種致癌高危型：16，18，31，33，35，39，45，51，52，56，58，59，68，73，82；3種可能致癌高危型：26，53，66；及12種低危型：6，11，40，42，43，44，54，61，70，

72，81/CP8304和89/CP6108型；以及男性同性戀中高發的84型。檢測探針針對兩個基因區，致癌性早期轉錄E6基因和衣殼蛋白晚期轉錄L1基因，避免了因病毒整合、變異或樣本降解而造成的假陰性問題。經兩輪擴增和采用先進的飛行質譜MALDI掃描，軟件自動分析報告HPV基因型結果，避免了人為目測判斷造成的誤差，檢測靈敏度高達單拷貝/反應。

經對200份同性戀肛拭子DNA標本檢測，發現64.5%(129/200) HPV陽性，其中混合型感染者51.9% (67/129)，最高達12種，總共檢出31種HPV類型。

經對135例宮頸癌組織標本作對比實驗，質譜法與凱普法(GA，CE,SFDA認證) 分別檢出HPV基因型為15種和11種，陽性率為97% (131/135) 和90.4% (122/135)。質譜法與凱普法所檢測的陽性標本122例和陰性標本4例完全吻合，用測序法補充驗證9例凱普檢測陰性的標本，結果與質譜法完全一致。質譜法與凱普法分別檢出混合型感染者55.6%(75/135) 和25.2% (34/135)，發現最高混合型分別為6種和3種HPV類型。

該方法的主要優勢：

高特異性：在高重數引物設計、試劑遴選及特異甄別等方面獨具匠心，徹底解決了目前多重探針混合，識別相似基因序列易產生交叉錯配的假陽性問題。經幾千例樣本測試和測序比對，特異性達100%。

高靈敏度：雙基因探針、兩輪PCR擴增和高特異性探針單堿基延伸反應，飛行質譜掃描，顯著提高了檢測致病HPV基因型的靈敏度，解決了現行試劑盒中因采用E或L單基因探針檢測而出現的結果不一致性及其所致的假陰性問題，達到每個反應單拷貝水平。

防污染：封閉式單孔完成全部反應，無須清洗，產物可即時降解。

通量靈活：每天檢測10-1000份樣本，每板可檢測7800重反應。

高自動化：軟件實時判讀檢測結果，避免了目測判讀的人為誤差。

低成本：毋需熒光標記，5µL反應體系，試劑用量低。

本方法廣泛適用于轉化醫學研究的各種男女性臨床樣本：血液、尿液、細胞、咽拭子、肛拭子、新鮮組織及福爾馬林固定石蠟包埋組織中31種HPV病毒DNA的分型測試。

本項服務將首先在國內首批醫學獨立實驗室北京德易醫檢開展。

服務地址：北京市西城區新街口外大街8號  

聯系熱線：masscan2012@yahoo.com

儀器信息：美國西格諾公司 www.sequenom.com

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