珀金埃爾默發布新品E3連接酶VHL結合試劑盒
VHL（von Hippel-Lindau）基因是一個抑癌基因，位于染色體3q25-26，編碼含有213氨基酸的VHL蛋白。該蛋白參與許多生物過程，與血管生成、細胞生長或細胞存活的調節密切相關。以及VHL蛋白作為E3泛素連接酶復合體的組成成分，通過泛素化途徑參與缺氧誘導因子HIF等靶蛋白的降解，因而受到蛋白降解靶向嵌合體（PROteolysis TArgeting Chimeria, PROTAC）技術的關注，作為靶點來開發PROTAC小分子藥物。
Distribution of the small-molecule ligands-based PROTACs
截止到目前VHL和CRBN是兩個最受關注的E3連接酶，發現新的E3連接酶配體或可改善蛋白酶體依賴性降解的選擇性。現PerkinElmer推出新品HTRF® Human VHL Binding Kit試劑盒，用來篩選可以和VHL特異性結合的化合物。
實驗原理
該實驗采用的競爭法模型，當化合物（VHL配體或PROTAC化合物）可以與VHL結合，就會和標記了熒光受體的配體（red ligand）競爭結合VHL蛋白，HTRF信號就會下降。
操作步驟
數據驗證
驗證一：使用兩種文獻已報道的VHL配體（VH-032和VH-298 ）進行驗證，結果如圖。
驗證二：使用四種VHL-based PROTAC化合物CRBN-6-5-5-VHL、TBK1、CM11和ARV-771進行驗證，結果與文獻報道相一致。
驗證三：DMSO耐受度
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